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2013年02月22日11:39 | 中国发展门户网 www.chinagate.cn | 给编辑写信 字号：T|T

附 录 E

(规范性附录)

粪大肠菌群仪器快速检测法

E.1　原理

粪大肠菌群仪器快速检测法，基于粪大肠菌群能产生β-半乳糖苷酶，分解邻-硝基苯/酚-β-D-吡喃半乳糖苷(o-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside，ONPG)使培养液呈黄色，通过光度检测及数据转换处理，得出单位体积(mL)或质量(g)粪便样品中含有的粪大肠菌群浓度值。

依单位体积(mL)或质量(g)粪便样品中含有的粪大肠菌群浓度值，换算成检出1CFU粪大肠菌的样品量，即粪大肠菌菌值。

E.2　设备与培养基

E.2.1　粪大肠菌群快速检测仪

E.2.1.1　仪器技术性能

仪器技术性能应符合下列要求：

a)进样体积：0.2 mL～5 mL；

b)测量范围：100 CFU/100 mL ～1.0×1011 CFU/100 mL；

c)最低检出限：100 CFU/100 mL；

d)培养温度：36.5 ℃±0.5 ℃或44.5 ℃±0.5 ℃；

e)检测周期：≤12 h。

E.2.1.2　仪器电源

仪器电源要求如下：

依现场实际情况分别可选择220V交流电源与12V直流电瓶电源。

E.2.1.3　粪大肠菌群快速检测仪应用培养基成分

粪大肠菌群快速检测仪应用培养基成分如下：

a)蛋白胨：10.0 g；

b)氯化钠：5.0 g；

c)邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG)：0.15 g；

d)N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸钠盐(HEPES钠盐)：25.0 g(pH调至7.0±0.1)；

e)乳糖：5.0 g；

f)酵母膏：5.0 g；

g)氯化镁：0.3 g；

h)蒸馏水：1000 mL。

将上述a)～g)加入h)中溶解，调pH至7.0±0.1，混匀，分装至5 mL带盖玻璃瓶中，115 ℃±1 ℃，灭菌20 min。储存于4 ℃暗处备用。

E.2.1.4　生理盐水稀释液

生理盐水稀释液成分如下：

a)氯化钠：8.5 g；

b)蒸馏水：1 000 mL。

将成分a)溶解于蒸馏水中，分装到锥形瓶内，121 ℃，20 min 灭菌备用。

E.2.1.5　0.03mol/L磷酸盐稀释液

0.03mol/L磷酸盐稀释液成分如下：

a)无水磷酸氢二钠：2.83 g；

b)磷酸二氢钾：1.36 g；

c)蒸馏水：1 000 mL。

将成分a)和 b)溶解于少量蒸馏水中，待完全溶解后，加蒸馏水至1 000 mL，121 ℃，20 min 灭菌备用。

E.2.2　其他器材

5 mL、1 mL可调加样枪与灭菌枪头、灭菌采样瓶、冰箱。

E.3　操作步骤

E.3.1　开机预热30min，查看历史数据界面温度，确认温度使温度达到测量要求并稳定。

E.3.2　将样品混合均匀，用加样枪取0.2mL待检样品，加入到内含5mL培养液的检测瓶中，混合均匀，记录编号并放入对应的检测槽中。

E.3.3　关闭仪器培养区后，在主界面下按下 “开始测试”键，进入测试界面，输入样本信息，按下“运行”键，开始检测运行。

E.3.4　检测运行时间一般不超过12h，仪器将测试结果自动储存备查并打印至记录纸带上。

E.3.5　样品色度、浑浊度高时，可用生理盐水(8.5 g/L)、0.03mol/L磷酸盐稀释液、脱氯灭菌自来水进行10倍稀释。

E.3.6　操作全过程应符合无菌操作要求。

E

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